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1、怎樣提高點樣效率? 點樣是造成TLC定量誤差的主要來源。 定量毛細(xì)管更適合較小體積的點樣;微量
注射器更適合較大體積的點樣。這主要是因為微量注射器受小氣泡、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細(xì)管理體制的
占樣誤差,建議一塊薄層板上用同一只定量毛細(xì)管。但應(yīng)注意更換樣品時,應(yīng)將毛細(xì)管用超聲波或不同性溶課劑清洗干凈
。在制備樣品時,溶樣溶劑黏度不能過高,以便于點樣;溶劑沸點過低則進樣體積易變,過高則會改變展開劑組成;對樣品溶解
度過高會使樣點發(fā)生空心現(xiàn)象,常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經(jīng)典TLC樣點原點一般為直徑3mm點間距離1-2cm底邊距離
1.5cm;HPLC樣點原點一般為直徑1mm點間距5mm底邊距1cm. 2、展開劑的選擇 TLC與HPLC相比,一個突出的優(yōu)點就是流動相的選
擇具有更大的靈活性,流動相的選擇的目的是使絕大部分樣品的Rf值位于0.1-0.7之間并達(dá)到較好的分離,與此對應(yīng)的是流動相
要有適當(dāng)?shù)膹姸群徒M成。流動相強度越大,溶質(zhì)Rf值越大,但很可能降低分離能力;另外單一溶劑很難分離較復(fù)雜的混合物、根
據(jù)相似相溶原理,要使用多元溶劑體系。一般展開劑體系選擇如下:根據(jù)分離樣品性質(zhì)、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個二元溶劑體系
,通過調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合Rf值,適合的Rf值找到后,再尋求性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個,以這三個組成為三點組成
一個三角形,則可看到:三角形頂點是二元體系,邊是三元體系,三角形內(nèi)是四元體系,并且性一致,可根據(jù)幾何原理得出任
一點組成,這種方法較為直觀,也較簡單。 理想的顯色希望靈敏度高,斑點顏色穩(wěn)定、斑點與背景間的對比度好,斑點的
大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比,在樣品組成并不已知的情況下,通用顯色方法顯得尤為重要. 通用顯色方法主要有:
1、紫外照射法:方便、不破壞樣品; 2、碘蒸氣法:通用性強,與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨使用; 3、熒光試劑:制
造熒光背景,使原來紫外下無熒光物質(zhì)被鑒別,有熒光物質(zhì)更明顯; 展開劑選擇的大概原則 選擇展開劑一般要用混合溶劑
:一般要有一種對所要展開樣品溶解度較大的溶劑,視樣品的性,再選用相應(yīng)的體系
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